Food Res Int (1區(qū)-TOP)?I 不只是解酒茶：藤茶精準調控YTHDF2/PGC-1α/SIRT3軸，對抗酒精肝損傷!（浙中醫(yī)-...

2025年3月21日，浙江中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院邱萍、浙江中醫(yī)藥大學藥學院中藥藥理李昌煜、浙江中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥科學院醫(yī)學科研中心陳方明及浙江工商大學海洋食品研究院沈清教授研究團隊在Food Research International（IF=8，中科院1區(qū)-TOP期刊）在線發(fā)表題為“Vine tea (Ampelopsis grossedentata) ameliorates chronic alcohol-induced hepatic steatosis, oxidative stress, and inflammation via YTHDF2/PGC-1α/SIRT3 axis”（藤茶（顯齒蛇葡萄，Ampelopsis grossedentata）通過 YTHDF2/PGC-1α/SIRT3 軸改善慢性酒精誘導的肝脂肪變性、氧化應激和炎癥）的研究論文。

該研究聚焦酒精相關性肝病（ALD）這一由長期過量飲酒驅動、臨床治療手段仍較為有限的重要肝臟疾病，圍繞傳統(tǒng)茶藥兩用植物莓茶（蛇葡萄，Ampelopsis grossedentata）的護肝作用及其分子機制開展了系統(tǒng)研究。作者首先利用 UPLC-Q-TOF-MS 對莓茶提取物（AGE）的化學成分進行分析，鑒定出包括二氫楊梅素、楊梅素、二氫槲皮素等在內的多種主要成分；隨后在 Lieber-DeCarli 飲食誘導的慢性酒精性肝損傷小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，AGE 可顯著降低 ALT、AST、ALP、LDH、肝臟 TG 和 TNF-α 水平，減輕脂質沉積、炎癥浸潤、氧化應激和線粒體超微結構損傷，并改善 MDA、GSH 等氧化還原指標。進一步結合轉錄組學、機器學習、WGCNA 和單細胞數(shù)據(jù)挖掘，研究將 m6A 讀取蛋白 YTHDF2 鎖定為 AGE 干預 ALD 的關鍵靶點，并揭示其下游與 PGC-1α/SIRT3 線粒體代謝和抗氧化通路密切相關。臨床肝組織樣本、免疫熒光和單細胞軌跡分析進一步提示，ALD 狀態(tài)下 YTHDF2 上調，而 PGC-1α 和 SIRT3 受抑，且高表達 YTHDF2 與肝細胞分化受阻、炎癥浸潤增強相關。功能驗證方面，體內敲低 Ythdf2 可部分模擬 AGE 的保護效應，減輕酒精誘導的肝損傷、脂肪變和氧化應激；體外在 THLE-2 細胞中過表達 YTHDF2 則會削弱 AGE 對 ROS 升高、線粒體功能下降及 PGC-1α/SIRT3 失衡的糾正作用。整體來看，這項工作不只是再次證明了莓茶具有抗酒精性肝損傷的活性，更重要的是首次將其作用機制明確指向 YTHDF2/PGC-1α/SIRT3 這一“m6A調控—線粒體穩(wěn)態(tài)—氧化應激”關鍵軸線，把傳統(tǒng)藥食資源與表觀轉錄組調控機制連接起來，為酒精相關性肝病的干預提供了一個較有新意的天然產物研究范式。當然，本文目前仍主要停留在動物和細胞層面的機制驗證階段，AGE 中具體發(fā)揮主導作用的物質基礎、YTHDF2 對 PGC-1α 的直接調控方式以及后續(xù)臨床轉化價值，仍有待進一步深入研究，但其作為“傳統(tǒng)茶資源＋新機制靶點”結合的代表性工作，已有較強的延展?jié)摿蛻孟胂罂臻g。

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【摘 要】

千余年來，蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata（Hand.-Mazz.）W. T. Wang）的葉片，即“莓茶”，一直被視為一種廣受歡迎的茶飲和傳統(tǒng)草藥，具有抗氧化、抗炎、護肝和抗病毒等作用。近年來，酒精相關性肝損傷的發(fā)生率持續(xù)上升，已對全球公共衛(wèi)生造成沉重負擔。既往研究表明，莓茶提取物（AGE）能夠改善酒精相關性肝病（ALD），但其發(fā)揮作用的藥理機制仍不清楚。

本研究首先采用 UPLC-Q-TOF-MS 對 AGE 的化學成分進行分析。隨后，在飼喂 Lieber-DeCarli 飲食的小鼠中建立 ALD 模型，并通過生化指標及肝臟病理變化評估 AGE 的護肝作用。此外，研究結合轉錄組學、加權基因共表達網絡分析和單細胞數(shù)據(jù)挖掘等多種生物信息學方法，揭示 YTHDF2/PGC-1α/SIRT3 信號軸可能是 AGE 發(fā)揮抗 ALD 作用的潛在機制。進一步結合 Western blot 和免疫熒光染色，對上述機制進行了驗證。

研究結果顯示，給予莓茶后，可顯著減輕慢性乙醇誘導的肝臟脂質沉積、氧化應激和炎癥。值得注意的是，敲低 YTHDF2 也可部分保護肝臟免受乙醇誘導的損傷。從機制上看，生物信息學分析以及體內外實驗共同表明，YTHDF2 是 AGE 治療 ALD 的關鍵藥理靶點，其作用通過下游 PGC-1α/SIRT3 通路實現(xiàn)。

總之，本研究首次證明，AGE 可通過抑制 YTHDF2、增強 PGC-1α 和 SIRT3 的表達來減輕乙醇誘導的肝損傷。作為一種兼具獨特藥用價值的茶食品，莓茶在 ALD 治療方面展現(xiàn)出顯著潛力和應用價值。

01

研究背景及科學問題

酒精相關性肝病（ALD）是由長期過量飲酒引起的重要健康問題，可導致脂肪肝、酒精性肝炎、肝硬化和/或肝細胞癌。ALD 是全球范圍內肝病相關發(fā)病和死亡的重要原因，對公共健康構成嚴重負擔。世界衛(wèi)生組織報告顯示，過量飲酒每年約造成 300 萬例死亡，占全部死亡的 5.3%，并占全球肝硬化相關死亡的 47.9%。目前，糖皮質激素被推薦用于治療重癥酒精性肝炎以降低短期死亡率，但其臨床應用受到諸多限制。此外，己酮可可堿、F652 及益生菌等治療策略仍處于臨床試驗階段。因此，隨著 ALD 所致肝病負擔不斷加重，迫切需要發(fā)現(xiàn)新的治療靶點并開發(fā)更有效的臨床藥物。

N6-甲基腺苷（m6A）是真核生物中最常見的 mRNA 轉錄后修飾形式，參與調控多種生理過程。這種動態(tài)且可逆的修飾由“寫入蛋白”產生，由“擦除蛋白”去除，并由“讀取蛋白”識別。近期研究表明，m6A 調控因子的異常會導致顯著的肝臟病理和生理功能障礙，進而影響脂質代謝、非酒精性脂肪性肝病和病毒性肝炎等過程。例如，在非酒精性脂肪性肝病中，脂質過載可導致 YTHDF2 和 AKT1 缺乏，使 YTHDF2 對 m6A 甲基化 circ-SLC9A6 的降解減少，從而造成脂質代謝紊亂。然而，m6A 甲基化在 ALD 中的作用及其調控機制仍研究不足。探索 m6A 調控因子的變化，可能為理解 ALD 的發(fā)病、進展及潛在治療靶點提供關鍵線索。

蛇葡萄嫩莖葉即莓茶，在中國傳統(tǒng)草本茶飲中具有悠久歷史。蛇葡萄提取物（AGE）具有廣泛生物活性，包括顯著的抗氧化、抗炎和降糖作用。研究表明，AGE 對包括 ALD、非酒精性脂肪性肝病和急性肝損傷在內的多種肝臟疾病具有明顯保護作用。目前研究已發(fā)現(xiàn)，蛇葡萄的主要植物化學成分包括黃酮類、萜類和多酚類化合物。其中，二氫楊梅素（DMY）是莓茶中最主要的活性黃酮，因其抗炎、護肝和降糖作用而受到廣泛關注，并已在許多國家作為膳食補充劑使用。

當前，高通量生物信息學平臺已被廣泛用于系統(tǒng)研究體內基因表達變化，是闡明傳統(tǒng)藥物生物學機制的重要工具。本研究整合轉錄組學、機器學習、加權基因共表達網絡分析及單細胞數(shù)據(jù)挖掘等前沿生物信息學方法，建立了 m6A 調控因子 YTHDF2 與 ALD 進展之間的新聯(lián)系。我們證明，YTHDF2 是 AGE 緩解慢性酒精攝入所致肝脂肪變和氧化應激的重要靶點，并進一步揭示了莓茶通過 YTHDF2/PGC-1α/SIRT3 軸改善 ALD 的新機制。

02

重要發(fā)現(xiàn)及亮點

3.1 AGE 的化學成分分析（圖1A–E）

采用 70% 乙醇提取蛇葡萄后，所得凍干提取物產率為 46%（圖1A–C）。利用 UPLC-Q-TOF-MS 對 AGE 的化學成分進行了系統(tǒng)分析。通過與 TCM MS/MS 數(shù)據(jù)庫比對，在正、負離子模式下共鑒定出 35 種化合物。AGE 的主要成分包括二氫楊梅素、楊梅素、二氫槲皮素、哌啶酸、槲皮苷、沒食子酸和根皮苷等（圖1D–E）。

Fig. 1. UPLC-Q-TOF-MS analysis of AGE ingredients.(A) Tender stems and leaves of Ampelopsis grossedentata. (B) The surface of dried A. grossedentata is accompanied by white DMY crystals. (C) 70 % ethanol extract of A. grossedentata leaf, lyophilized to a powder. (D) Total ion chromatograms in positive mode analysis. (E) Total ion chromatograms in negative mode analysis.

3.2 AGE 可減輕 ALD 小鼠的肝損傷（圖2A–J）

研究通過連續(xù) 7 周飼喂含乙醇飲食建立 ALD 小鼠模型（圖2A）。血清生化指標顯示，與正常對照組相比，乙醇組小鼠的 ALT、AST、ALP 和 LDH 水平均顯著升高，提示慢性酒精攝入導致明顯肝功能損害。AGE（150 mg/kg 和 300 mg/kg）以及水飛薊素處理均能顯著改善這種肝損傷（圖2B–E）。

Fig. 2. AGE alleviates alcohol-induced liver injury.(A) Experimental design flowchart. (B-E) Serum ALT, AST, ALP, and LDH levels (n = 6). (F) H&E and oil red O staining showing pathological changes in the liver (×200), TEM analysis showing ultrastructural damage of hepatocytes (×30,000), LD: lipid droplet. (G) Hepatic TG levels (n = 6). (H) Hepatic TNF-α levels (n = 6). (I-J) Hepatic MDA and GSH levels (n = 6). The results are expressed as the mean ± SD, n = 6. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001, ****p < 0.0001. (For interpretation of the references to colour in this figure legend, the reader is referred to the web version of this article.)

H&E 和油紅 O 染色顯示，對照組肝細胞排列整齊、邊界清晰；而乙醇組存在明顯脂質沉積和炎性細胞浸潤。AGE 和水飛薊素補充可明顯減輕乙醇誘導的異常病理改變。透射電鏡分析進一步表明，乙醇喂養(yǎng)小鼠肝細胞內脂滴沉積明顯，線粒體嵴遭到破壞；而 AGE 和水飛薊素處理后，脂滴明顯減少，線粒體形態(tài)得到恢復，內質網排列也趨于整齊（圖2F）。

此外，乙醇組肝組織 TG 水平顯著升高，而 AGE 和水飛薊素均可顯著降低該指標（圖2G）。AGE 還能顯著降低肝臟 TNF-α 水平，提示其具有改善炎癥的作用（圖2H）。在抗氧化方面，乙醇組肝臟 MDA 水平明顯升高，而 GSH 水平顯著下降；AGE 處理則明顯逆轉了這些異常變化（圖2I–J）。這些結果表明，AGE 對 ALD 具有劑量依賴性的護肝作用。

3.3 ALD 中差異表達 m6A 調控因子的鑒定及免疫浸潤分析（圖3A–H）

研究利用 GSE28619 和 GSE142530 數(shù)據(jù)集分析 ALD 患者與正常人肝組織中 26 個 m6A 調控基因的表達譜，共鑒定出 12 個差異表達的 m6A 基因，其中包括 2 個寫入蛋白、9 個讀取蛋白和 1 個擦除蛋白。熱圖和箱線圖顯示，與健康對照相比，ALD 樣本中 YTHDF2 和 HNRNPC 顯著上調，而 METTL3、ZC3H13、YTHDC1、YTHDF1、FMR1、LRPPRC、HNRNPA2B1、IGFBP1、IGFBP3 和 ALKBH5 下調（圖3A–B）。

Fig. 3. Identification of DE-m6A regulators in ALD and analysis of immune cell infiltration.(A-B) Expression of m6A regulatory factors in normal and ALD liver tissue. Healthy controls, n = 7; ALD, n = 15. (C) ALD patients were categorized into two m6A patterns using consensus clustering analysis (k = 2). (D-E) Expression of m6A regulators in clusters A and B. (F-G) Abundance of immune cell infiltration in clusters A and B. (H) Spearman correlation analysis of m6A regulators and infiltrating immune cells, red: positive correlation, blue: negative correlation. In all heat maps, the change of expression value is represented by log|FC|, red: upregulated, blue: down-regulated. The results are expressed as the mean ± SD, *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001, ****p < 0.0001.

基于這 12 個關鍵 m6A 調控因子，研究進一步進行一致性聚類分析，結果表明當 k=2 時分群效果最佳，因此將樣本分為 m6A cluster A 和 cluster B 兩種模式（圖3C）。兩類之間在 METTL14、YTHDF1 和 YTHDF2 的表達上存在顯著差異（圖3D–E）。

隨后，研究采用 ssGSEA 比較 cluster A 和 cluster B 的免疫細胞浸潤豐度，共識別出 23 類免疫細胞，其中 cluster B 中大多數(shù)免疫細胞的浸潤程度均明顯高于 cluster A（圖3F–G）。進一步 Spearman 相關分析顯示，大多數(shù) m6A 調控因子與免疫細胞呈負相關，而 YTHDF2 與多類免疫細胞呈顯著正相關，包括活化樹突細胞、未成熟樹突細胞、MDSCs、肥大細胞、漿細胞樣樹突細胞、調節(jié)性 T 細胞、濾泡輔助性 T 細胞和 1 型輔助性 T 細胞等（圖3H）。這提示在 ALD 肝臟中，YTHDF2 的高表達可能增強相關免疫細胞浸潤，進而影響免疫微環(huán)境。

3.4 YTHDF2 是介導 AGE 干預 ALD 的關鍵 m6A 調控因子（圖4A–H）

為了篩選 ALD 的特征性 m6A 調控因子，研究采用 LASSO 回歸和 SVM-RFE 兩種機器學習模型對 12 個差異表達 m6A 因子進行預測。LASSO 回歸分析提示，YTHDF1、YTHDF2、HNRNPC、FMR1、HNRNPA2B1、IGFBP1、IGFBP3 和 ALKBH5 這 8 個因子可能與 ALD 進展相關（圖4A）。SVM-RFE 進一步將范圍縮小至 2 個因子：YTHDF2 和 RBM15（圖4B–C）。

Fig. 4. Identification of key m6A regulators mediating AGE intervention in ALD.(A) Coefficients obtained from Lasso regression analysis and selection of tuning parameters through 1000 cross-validations. (B) Application of the SVM-REF approach to identify signature genes in ALD and normal samples. (C) Venn diagram illustrating the overlap of m6A regulatory factors identified by both algorithms. (D, E) ROC curve for predicting prevalence in the GSE28619 and GSE142530 dataset, AUC (Area Under the Curve): the area under the ROC curve. A higher AUC value, approaching 1, indicates better diagnostic performance and greater accuracy of the metric. (F) Volcano plots displaying DEGs in the RNA-seq data, red: significant up-regulation, blue: significant down-regulation, grey: no significant difference. (G) Heatmap showing the expression of m6A genes in the RNA-seq data, gene expression changes are represented by log|FC|, red: up-regulated, blue: down regulated. (H) Venn diagram depicting the overlap of DEGs in the transcriptome and machine learning results. (For interpretation of the references to colour in this figure legend, the reader is referred to the web version of this article.)

以 GSE28619 為訓練集、GSE142530 為驗證集繪制 ROC 曲線后發(fā)現(xiàn)，YTHDF2 和 RBM15 在訓練集中的 AUC 分別為 0.99 和 1.0，顯示出很高的預測準確性（圖4D）；在驗證集中 AUC 分別為 0.575 和 0.633，仍具有一定預測價值（圖4E）。這些結果提示，YTHDF2 和 RBM15 可能作為 ALD 的特征性 m6A 調控因子，具有一定診斷意義。

為進一步驗證 AGE 干預 ALD 時所涉及的關鍵 m6A 因子，研究對 ALD 小鼠肝臟進行了 RNA-seq 分析，結果在 EtOH vs. normal 比較中獲得 3106 個差異基因，在 AGE vs. EtOH 比較中獲得 1214 個差異基因（圖4F）。RNA-seq 熱圖展示了 12 個 m6A 基因的表達變化（圖4G）。綜合轉錄組和機器學習結果后，研究認為 YTHDF2 可能是介導 AGE 干預 ALD 的關鍵 m6A 調控因子（圖4H）。

3.5 生物信息學分析揭示 PGC-1α/SIRT3 是 YTHDF2 的下游通路（圖5A–H）

為進一步探究 YTHDF2 的下游調控靶點，研究對 GSE28619 數(shù)據(jù)集進行了 WGCNA 分析。通過構建共表達網絡并合并高度相關模塊，共識別出 13 個模塊（圖5A）。其中，黑色模塊與 ALD 表型的相關性最強（R=0.95，P=2e?11，圖5B），且該模塊中模塊成員度與基因顯著性之間也具有很高相關性（圖5C）。

Fig. 5. Bioinformatics analysis revealing downstream targets regulated by YTHDF2 in ALD.(A) Initial and combined modules beneath the tree of clustering. (B) Module-trait correlation heat map showing the correlation between clinical traits for normal control subjects [C] and patients with ALD [P], red: positive correlation, blue: negative correlation. (C) Correlation between the module membership and gene significance in the black module. (D) Venn diagram depicting the overlapping targets of M6A2Target and WGCNA. (E) Depiction of the SVM-REF approach to identify signature genes in ALD and normal samples. (F) Venn diagram depicting the overlap of 5 sources: ALD-related targets, DEGs from GEO (N > 3), PGC-1α downstream targets (IPA), mitochondria-related genes, and DEGs from RNAseq data (AGE vs. EtOH). (G) Relative expression of 10 genes in the mouse liver transcriptome (n = 3). (H) SIRT3 immunohistochemistry in mouse liver. The results are presented as the mean ± SD, n = 3. *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001. (For interpretation of the references to colour in this figure legend, the reader is referred to the web version of this article.)

隨后，將黑色模塊中的 2558 個基因與 M6A2Target 數(shù)據(jù)庫中 YTHDF2 的 97 個靶基因進行交集分析，最終篩得 19 個 ALD 中受 YTHDF2 調控的下游基因（圖5D）。進一步應用 SVM-RFE 算法，從中識別出 8 個關鍵基因：IRS1、EGFR、NR1H3、LHPP、CREBBP、LATS1、GADD45A 和 PPARGC1A（圖5E）。

PPARGC1A 編碼蛋白為 PGC-1α。既往研究表明，PGC-1α 的激活可通過抑制脂質代謝紊亂和線粒體 ROS 過量生成來緩解 ALD，因此作者推測其可能是 YTHDF2 在 ALD 中的重要調控靶點。進一步整合 PGC-1α 下游基因、GEO 高頻差異基因、ALD 相關靶點、線粒體相關基因以及 AGE 影響的差異基因后，最終聚焦到 10 個重疊基因：PIK3R1、EGFR、ACACB、FGF21、GDF15、SIRT3、FABP4、CEBPA、CEBPB 和 TIMP2（圖5F）。其中，轉錄組柱狀圖顯示了這些基因在小鼠肝臟中的相對表達變化（圖5G）。結合實驗結果和文獻分析，研究最終確定 SIRT3 為 PGC-1α 的關鍵下游信號分子（圖5H）。由于 SIRT3 蛋白僅定位于線粒體，因此推測 AGE 可能通過調控 PGC-1α/SIRT3 通路改善線粒體功能，從而緩解 ALD。

3.6 高表達 YTHDF2 延緩肝細胞分化并抑制 PGC-1α/SIRT3 表達（圖6A–J）

為了明確 YTHDF2/PGC-1α/SIRT3 信號軸是否在肝細胞中被特異調控，研究下載了 ALD 患者單細胞數(shù)據(jù)集 GSE236382，并鑒定出 8 種主要細胞類型（圖6A）。氣泡圖顯示，YTHDF2、PPARGC1A 和 SIRT3 在肝細胞中具有較高表達豐度（圖6B）。

Fig. 6. Single-cell data mining and staining of patient biopsy samples.(A) UMAP plot of all 5 integrated samples, identified by cell type (GSE236382). (B) Bubble plot depicting the expression levels of YTHDF2, PPARGC1A, and SIRT3 in each cell subtype. (C) Trajectory analysis showing the effects of high and low YTHDF2 expression on hepatocyte differentiation fate. (D) Trajectory exhibited state-specific progression patterns in hepatocytes. (E) Pseudotime analysis of hepatocytes. (F) UMAP plot of all integrated samples, identified by cell type (GSE136103). (G) Bubble plot showing YTHDF2 expression levels in each cell subtype and under differential conditions. (H) H&E staining of normal and ALD liver samples in humans (200×). (I) Immunofluorescence staining of YTHDF2 and PGC-1α in human liver samples (400×). (J) Immunofluorescence staining of SIRT3 in human liver samples (400×).

對全部肝細胞分化軌跡的時序分析發(fā)現(xiàn)，不同水平的 YTHDF2 表達會顯著改變肝細胞分化命運。在發(fā)育軌跡中，低表達 YTHDF2 的肝細胞位于分支點 1、2 和 3，而隨后出現(xiàn)兩支高表達 YTHDF2 的肝細胞分支（圖6C），并進一步形成 11 個分化狀態(tài)（圖6D）。值得注意的是，低 YTHDF2 表達的肝細胞主要位于較晚分化階段，而高 YTHDF2 表達的肝細胞偽時間值較低，提示其發(fā)育和分化程度更低（圖6E）。

研究進一步分析了另一單細胞數(shù)據(jù)集 GSE136103，共鑒定出 15 種主要細胞類型（圖6F）。結果同樣顯示，與健康個體相比，ALD 患者肝細胞中的 YTHDF2 表達明顯更高（圖6G）。

為了驗證 ALD 中 YTHDF2、PGC-1α 和 SIRT3 的變化，研究收集了 ALD 患者肝組織樣本進行病理分析。H&E 染色顯示，ALD 組存在明顯炎癥浸潤和脂肪變性（圖6H）。免疫熒光染色進一步顯示，與健康樣本相比，ALD 樣本中 YTHDF2 蛋白表達明顯升高，而 PGC-1α 和 SIRT3 的表達顯著降低（圖6I–J）。這些結果提示，在 ALD 中，YTHDF2 介導了肝細胞發(fā)育分化延遲以及 PGC-1α/SIRT3 表達失衡。

3.7 敲低 Ythdf2 可減輕酒精誘導的肝損傷（圖7A–G）

研究通過 AAV 介導構建 Ythdf2 敲低小鼠，并給予含酒精飲食。結果顯示，與正常小鼠相比，乙醇處理可顯著升高血清 ALT、AST、ALP 及肝臟 TG、MDA 水平，并降低 GSH 水平；而敲低 Ythdf2 可明顯緩解這些酒精誘導的肝功能損傷和氧化應激改變（圖7A–F）。

Fig. 7. YTHDF2 deletion alleviates alcohol-induced liver damage.(A-C) Serum levels of ALT, AST and ALP in mice (n = 6). (D–F) Hepatic levels of TG, MDA and GSH in mice (n = 6). (G) H&E and oil red O staining of mouse liver tissues (400×). The results are presented as the mean ± SD, *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001, ****p < 0.0001, ns (non-significant). (For interpretation of the references to colour in this figure legend, the reader is referred to the web version of this article.)

從組織學角度看，Ythdf2 敲低小鼠肝臟本身未見明顯異常；但在酒精處理條件下，Ythdf2 敲低可顯著減輕長期飲酒所致的肝臟炎癥浸潤和脂質沉積（圖7G）。這些結果表明，酒精攝入可能通過上調 YTHDF2 誘導肝損傷，而抑制 YTHDF2 表達則可降低肝細胞對乙醇損傷的敏感性。

3.8 AGE 通過抑制 YTHDF2 改善肝臟炎癥并糾正 PGC-1α/SIRT3 通路異常（圖8A–G）

為明確炎癥因子是否受 YTHDF2 調控，研究分析了 GSE28619、GSE142530 和 E-MTAB-2664 數(shù)據(jù)集中炎癥相關差異基因與 YTHDF2 的相關性（圖8A）。ELISA 結果顯示，與正常組相比，酒精誘導小鼠血清中的 CXCL5 和 CXCL10 水平均顯著升高；而 AGE（300 mg/kg）處理和 Ythdf2 敲低均可顯著降低這兩種趨化因子的水平（圖8B）。

Fig. 8. AGE improvements to hepatic inflammation and PGC-1α/SIRT3 expression are mediated by YTHDF2.(A) Spearman correlation analysis of YTHDF2 with 16 cytokines. (B) Serum levels of CXCL5 and CXCL10 in mice (n = 6).

進一步檢測線粒體抗氧化酶 SOD2 和線粒體復合物 I 活性后發(fā)現(xiàn)，酒精暴露顯著降低二者水平，而 AGE（300 mg/kg）處理及 Ythdf2 敲低均可明顯改善（圖8C–D）。隨后檢測 YTHDF2、PGC-1α 和 SIRT3 的表達變化。RT-qPCR 結果顯示，酒精處理可損傷 PGC-1α mRNA 表達，而 AGE 和 Ythdf2 敲低均可恢復這一變化（圖8E）。Western blot 結果進一步表明，長期酒精攝入可顯著升高 YTHDF2 表達，同時降低 PGC-1α 和 SIRT3 表達，而 AGE（300 mg/kg）可明顯逆轉這一趨勢；同時，Ythdf2 敲低也可顯著阻止酒精誘導的 PGC-1α/SIRT3 通路紊亂（圖8F）。免疫熒光染色顯示出一致的表達趨勢（圖8G）。

這些結果表明，Ythdf2 敲低可恢復 PGC-1α 的 mRNA 和蛋白水平，AGE 可能正是通過抑制 YTHDF2 來糾正 ALD 中 PGC-1α/SIRT3 通路的失衡。

3.9 AGE 通過 YTHDF2/PGC-1α/SIRT3 軸在體外降低 ROS 水平（圖9A–E）

為了進一步闡明 YTHDF2 在 AGE 作用機制中的參與，研究在 THLE-2 細胞中考察了 YTHDF2 過表達對酒精損傷及 AGE 干預效果的影響。CCK8 結果顯示，AGE 可顯著改善酒精誘導的細胞活力下降，而 YTHDF2 過表達則會進一步加重酒精暴露后的細胞死亡，并削弱 AGE 的保護作用（圖9A）。

Fig. 9. AGE reduces the ROS levels through the YTHDF2/PGC-1α/SIRT3 axis in THLE-2 cells.

鑒于氧化應激介導的肝損傷在 ALD 中具有關鍵作用，研究進一步檢測了細胞內 ROS 水平。結果顯示，酒精暴露顯著增加 ROS 生成，而 AGE 處理可明顯降低 ROS 水平；與單純酒精刺激相比，YTHDF2 過表達會進一步加重酒精誘導的氧化損傷，并削弱 AGE 的改善作用（圖9B）。與 ROS 變化相反，乙醇損傷導致線粒體復合物 I 活性下降，而 AGE 可提升其活性；但在 YTHDF2 過表達條件下，這一改善作用明顯減弱（圖9C）。

研究還進一步檢測了 YTHDF2/PGC-1α/SIRT3 軸的表達。RT-qPCR 結果表明，酒精刺激可顯著降低 PGC-1α mRNA 水平，而 AGE 可緩解該變化；但 YTHDF2 過表達會進一步降低酒精條件下的 PGC-1α mRNA 水平，從而抑制 AGE 的有益作用，這可能與 YTHDF2 促進 PGC-1α mRNA 降解有關（圖9D）。Western blot 結果顯示，與對照組相比，酒精處理可顯著升高 YTHDF2 蛋白表達，并明顯降低 PGC-1α/SIRT3 表達；AGE 能有效逆轉這些變化。而在 YTHDF2 過表達細胞中，酒精對 PGC-1α/SIRT3 的抑制作用進一步增強，AGE 對 PGC-1α/SIRT3 的提升作用則明顯減弱（圖9E）。

總體來看，這些結果表明，YTHDF2 過表達會增強肝細胞對乙醇損傷的敏感性，而 AGE 可能通過調控 YTHDF2/PGC-1α/SIRT3 信號軸來減輕乙醇誘導的線粒體氧化應激。

【Citation】:Luo Q, Qiu J, Chen M, et al. Vine tea (Ampelopsis grossedentata) ameliorates chronic alcohol-induced hepatic steatosis, oxidative stress, and inflammation via YTHDF2/PGC-1α/SIRT3 axis[J].Food Research International,2025, 209: 116321.

【貢獻】★★★★★

本文首次證明，莓茶提取物 AGE 能通過抑制 YTHDF2、增強 PGC-1α 和 SIRT3 的表達，從而減輕乙醇誘導的肝損傷。AGE 可顯著改善慢性酒精導致的肝脂肪變、氧化應激和炎癥反應，其關鍵機制與 YTHDF2/PGC-1α/SIRT3 信號軸密切相關。作為一種兼具食用和藥用價值的茶食品，莓茶在酒精相關性肝病的防治中具有較大的開發(fā)潛力。

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