提細胞外囊泡(EVs),是不容易的。植物榨汁破壁后雜質多;動物組織,樣本珍貴量少,一步操作失誤全盤報廢;細胞上清,面臨超離、層析、切向流……方法選到頭禿,純度和得率永遠在打架。
超離都說純度高,可自己一轉,沉淀里全是蛋白聚集體,得率太低;實驗室級別的問題,無法初步標準化和規模化,用切向流,濃縮完一測,顆粒數也太少了;層析柱聽著是高級,可純化后樣本稀稀拉拉……就算過了提取這一關,純度夠不夠?顆粒損失大不大?后續實驗能不能用?審稿人一句「請詳細說明方法學依據」,就能讓你改到崩潰。
這一次,宇玫博生物用一份扎扎實實的對比實驗,一次性把這些問題講透了。他們以 293T 細胞無血清上清為模型,系統對比了「切向流」、「切向流 + 層析」、「切向流 + 超離」三種分級提取工藝。不玩虛的,每一步都用NTA 粒徑、TEM 電鏡、BCA 蛋白濃度的實測數據說話——純度高不高、顆粒丟沒丟、成本劃不劃算,一目了然。
而且,宇玫博的大規模提取服務,遠不止于細胞上清。植物樣本(榨汁破壁)、動物組織(勻漿處理)、各類細胞上清,他們均有成熟的標準化工藝流程,可根據您的樣本類型定制化提取驗證,幫您繞開「樣本不同、方法不適用」的坑。
更值得關注的是,基于這些標準化工藝,宇玫博還提供多種來源的外泌體/細胞外囊泡現貨——均經過嚴格質檢,批次穩定,即買即用,幫您省去方法開發的時間和試錯成本。接下來,這份對比實驗報告,將帶你一次性看清:不同工藝路線,到底該怎么選。
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一、分級策略:從高效富集到極致純化
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級別一:切向流
提取處理:將 293T 上清原液過 0.22 μm 濾膜后,使用 300K 中空纖維柱濃縮 10 倍,濃縮液過 0.22 μm 濾膜后即為「切向流」級提取產品;
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級別二:切向流 + 層析
提取處理:
1. 將 293T 上清原液過 0.22 μm 濾膜后,使用 300K 中空纖維柱濃縮 10 倍,濃縮液過 0.22 μm 濾膜;
2. 過膜后濃縮液過層析柱,收集外泌體餾分;
3. 使用 300K 中空纖維柱將餾分濃縮 10 倍后過 0.22 μm 濾膜,得到高純「切向流 + 層析」級別的外泌體產品。
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級別三:切向流 + 超離
提取處理:
1. 將 293T 上清原液過 0.22 μm 濾膜后,使用 300K 中空纖維柱濃縮 10 倍,濃縮液過 0.22 μm 濾膜;
2. 過膜后的濃縮液 4℃,100,000 g 超離 120 min 后,用適量 PBS 重懸,重懸液過 0.22 μm 濾膜后得到「切向流 + 超離」級別的外泌體產品;
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二、硬核數據對比:
所有工藝的性能,最終由數據說話。基于 293T 細胞上清的大規模提取實測數據,三級方案的差異一目了然:
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293T 細胞上清三種級別的提取,得到的外泌體產品純度均能達到 1.0E+08 個/mL 以上;
作為大規模提取的第一步,切向流步驟的蛋白去除率在 90% 以上,所以終產品的 BCA 都相對較低;
切向流去除了大量的蛋白和小顆粒的情況下,層析進一步去除部分蛋白,提高了產品純度;
外泌體產品的 BCA 濃度與純度不可兼得,強行濃縮會使顆粒損失增多;
對比上清原液與其他提取方法看,超離提取的外泌體體積較少,顆粒損失較高;
單獨看超離提取得到的外泌體是質檢合格的;
三、場景化選擇指南:為您的需求精準匹配
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注:以上數據基于 293T 細胞無血清上清實測。其他細胞上清(如干細胞上清、含血清培養上清)可根據需求提供定制化提取驗證。
四、不止于指南:宇玫博(Umibio)能為您做更多
上面的選擇指南是基于細胞上清,但如果您的研究樣本是植物汁液、動物組織、中草藥提取液呢?
宇玫博的大規模提取服務,正是為解決這類「非標樣本」難題而設。從植物榨汁破壁到動物組織勻漿再到各類細胞上清,我們均開發了成熟的標準化工藝流程,可為您提供定制化的提取驗證與全鏈條服務,幫您繞開「樣本不同、方法不適用」的坑。
此外,如果您不想耗費數月時間在方法開發上,宇玫博還提供多種來源的外泌體/細胞外囊泡現貨。所有產品均基于上述標準化工藝制備,經過嚴格的多維度質檢,批次穩定、即買即用,助您跳過最磨人的提取階段,直接聚焦下游功能實驗。現識別下方二維碼,可在線咨詢溝通~
宇玫博(Umibio)分級提取方案,以清晰的工藝路徑、扎實的實驗數據和完善的表征體系,解決了外泌體制備中「純度、得率、濃度」不可兼得的三角難題。研究者可根據明確的應用場景導向,選擇最經濟、最有效的制備路徑,無需再為方法學選擇而困擾。同時,宇玫博將這一技術體系延伸至植物、動物、細胞等多類樣本的大規模提取服務,并提供標準化制備的現貨外泌體產品,全方位助力外泌體研究從「提取」到「應用」的加速推進。選擇宇玫博(Umibio),選擇專業。讓我們攜手,從精準制備開始,駕馭外泌體的未來。
內容策劃:王丹琦
內容審核:吳軍
題圖來源:圖蟲創意
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